5-Laser-Vollspektrum-Durchflusszytometer

1. Allgemeine Beschreibung des Beschaffungsvorhabens - Gerätebezeichnung: Spektrales Durchflusszytometer mit 5-Laser-Konfiguration. - Einsatzzweck: Hochmultiparametrische, spektrale Durchflusszytometrie auf Einzelzellebene. - Forschungskontext: Das Gerät ist zentraler Bestandteil der Core Facility "Zentrum für Einzelzell-Analyse" (FlowKon) der Universität Konstanz und unterstützt interdisziplinäre Forschungsprojekte in den Lebenswissenschaften. Es wird u. a. in Forschungsverbünden wie dem SFB/TRR 353 "Regulation of cell death decisions", dem GRK 3227/0 sowie im geplanten SFB 1756 eingesetzt und ist integraler Bestandteil der Single-Cell-Analyseplattform.

- 2. Leistungsgegenstand - Lieferumfang: Schlüsselfertiges, vollständig funktionsfähiges Spektral-Durchflusszytometer. - Komponenten: Hauptgerät, automatisierter Probenwechsler (Sample Loader), Steuerungs-PC. - Software: Vollversionen für Gerätesteuerung, spektrales Unmixing und Datenanalyse. - Dienstleistungen: Transport frei Verwendungsstelle, Installation, Kalibrierung, Inbetriebnahme. - Schulung: Mehrtägige Applikations- und Nutzerschnittstellen-Einweisung für mindestens 2 Personen. - Gewährleistung: Mindestens 3 Jahre Vollgarantie inklusive vertraglich zugesicherter Wartungsleistungen.

3. Funktionale Anforderungen (zwingend) - Hochmultiparametrische Einzelzell-Analyse: Simultanauswertung von >45 Parametern aus einer Einzelzelle. - Spektrales Unmixing: Mathematische Trennung überlappender Emissionsspektren in Echtzeit. - Kombinationsmessung überlappender Fluorochrome: Gleichzeitige Auflösung von BV421, Super Bright 436 und eFluor 450 sowie APC und Alexa Fluor 647 in einem Panel. - Simultane Proteindetektion: Fluoreszierende Proteine (GFP, mCherry, CFP, YFP) müssen parallel zu DNA-Farbstoffen (DAPI) gemessen werden können. - Das System muss mit Avalanche-Photodioden (APDs) oder einer technologisch gleichwertigen Detektortechnologie ausgestattet sein, die eine hohe Quanteneffizienz insbesondere im roten und nahinfraroten Spektralbereich sowie eine sensitive Detektion schwach exprimierter Fluoreszenzsignale ermöglicht (niedrige MESF-Werte, um durch die erhöhte Sensitivtät auch schwache Marker zuverlässig zu detektieren). - Autofluoreszenz-Extraktion: Mathematische Extraktion multipler, zellspezifischer Autofluoreszenz-Spektren während der laufenden Messung. - Label-Free-Separation: Identifikation und Abgrenzung von Zellpopulationen ausschließlich anhand ihrer intrinsischen Autofluoreszenz-Signale. - Automatisierter Probendurchsatz: Integrierter, softwaregesteuerter Probenwechsler für Multiwell-Platten. - Plattform-Validierung und Assay-Transfer: Das System muss auf einer wissenschaftlich breit dokumentierten Technologieplattform basieren. Für die mathematische Entkopplung (Unmixing) müssen umfangreiche, herstellerseitig oder durch eine globale wissenschaftliche Anwendergemeinschaft validierte Referenzspektren und Standardarbeitsanweisungen (SOPs) direkt digital oder über offene Repositorien importierbar sein.

4. Technische Mindestanforderungen (zwingend) 4.1 Optisches System und Anregung - Anforderung: 5 räumlich getrennte Laserlinien mit folgenden Wellenlängenbereichen und Mindestleistungen: o UV: 355 nm (\(\ge \) 20 mW) o Violett: 405 nm (\(\ge \) 100 mW) o Blau: 488 nm (\(\ge \) 50 mW) o Gelb-Grün: 561 nm (\(\ge \) 50 mW) o Rot: 640 nm (\(\ge \) 80 mW)

- Mindestens 64 dedizierte Fluoreszenz-Detektionskanäle über das gesamte Emissionsspektrum (365 nm bis 829 nm). Feste optische Konfiguration ohne die Notwendigkeit manueller Filterwechsel.

- Detektion minimaler Partikelgrößen ab \(\le \) 0,1 µm (mittels Kalibrierungs-Beads über Streulicht). Fluoreszenzsensitivität von FITC < 6 MESF, PE < 6 MESF, APC < 6 MESF, Pacific Blue < 6 MESF.

- Kontinuierliche Messung und Überwachung des Probenflusses in Echtzeit mit automatischer Erkennung von Luftblasen/Verstopfungen sowie automatischer Anpassung der Laserverzögerungen (Laser Delays) bei variierenden Durchflussraten.

- Messgeschwindigkeit von mindestens 35.000 Ereignissen (Events) pro Sekunde bei gleichzeitigem spektralen Unmixing in Echtzeit.

5. Optionale / wünschenswerte Anforderungen - Biosicherheit: Optimiertes Fluidiksystem mit nachgewiesener Minimierung des Aerosolbildungsrisikos (wünschenswert für die Arbeit mit potenziell infektiösen humanen Primärzellen).

6. Kompatibilität / Integration (Methodisches Risiko und Validierung) - Plattform-Kompatibilität zur Risikominimierung: Das System muss technisch in der Lage sein, existierende, wissenschaftlich publizierte und verifizierte Mehrfarbenpanels von Verbundpartnern des SFB/TRR 353 ohne gerätespezifische mathematische Neukalibrierung des optischen Detektionspfades zu übernehmen. Dies ist zwingend erforderlich, um den laborübergreifenden Validierungsaufwand bei der Einführung neuer Assays zu minimieren und ein methodisches Risiko beim Transfer komplexer Protokolle auszuschließen. - Softwareunabhängigkeit: Das System muss offene Datenformate (FCS 3.0 / 3.1) exportieren, um eine herstellerunabhängige Nachbereitung auf bestehender Drittanbietersoftware (z. B. FlowKon) zu gewährleisten.

7. Liefer- und Leistungsumfang - Lieferung frei Verwendungsstelle (Core Facility Single Cell Center). - Fachgerechte Installation und Qualifizierung (IQ/OQ) durch den Hersteller. - Technische Dokumentation wahlweise in Deutsch oder Englisch.

8. Service / Wartung / Support - Garantie: 3 Jahre Vollgarantie auf alle Bauteile (inkl. Laser und Detektoren). - Wartung: Mindestens eine präventive Vor-Ort-Wartung pro Jahr gemäß Herstellervorgaben während des Garantiezeitraums. - Support: Technischer Support via Hotline/Remote-Zugriff; garantierte Vor-Ort-Reaktionszeit im Servicefall von maximal 48 Stunden an Werktagen.

9. Abnahmekriterien - Erfolgreicher Abschluss der Installation und Funktionsprüfung (IQ/OQ). - Nachweis der geforderten Sensitivitäten (MESF-Werte) mittels standardisierter Beads. - Fehlerfreies spektrales Unmixing eines 40+-Farben-Referenzpa